張建文 教授     陳仁焜 副研究員

       目前人體臨床試驗已顯示樹突細胞疫苗具安全性，但仍未達到完全治癒癌症的目標，因此如何透過生物或工程技術進一步改造樹突細胞，以提升其免疫治療活性實為當前研發重點。著眼於此，本計畫提出結合微流道轉染系統與 mRNA 奈米材料應用，探討物理性細胞膜擾動對於樹突細胞攝取 mRNA 奈米顆粒之攝取，透過參數與機制探討，期能提高樹突細胞改造效率，獲取高免疫活性之工程改造樹突細胞。我們將先進行生物可分解 mRNA 奈米顆粒合成，鑑定核酸包覆效率、粒徑、表面電位與粒子穩定性。接著探討 eGFP-mRNA 奈米顆粒對樹突細胞之轉染參數，以螢光顯微鏡與流式細胞儀觀察、定量轉染效率，以 alamarBlue assay 探討奈米顆粒劑量與細胞毒性關聯。目標為獲 得高細胞存活率之 mRNA奈米顆粒劑量。我們將設計製作一系列微流道轉染統，探討不同流道設計和體參數對於樹突細胞攝取 eGFP-mRNA 奈米顆粒之轉染效果。並探討細胞對 eGFP-mRNA 奈米顆粒之攝取機制。接著將採用上述實驗所獲致之最佳微流道轉染參數，將 CCR7-mRNA 奈米顆粒進行樹突細胞之轉染，以獲取 CCR7 表達之樹突細胞 (CCR7DC)。將以體外實驗確認 CCR7DC 對於 T 細胞之活化作用。我們將比較 DC 與 CCR7DC 於淋巴結累積的差異性，及其癌症治療效果，並將應用新穎分子顯影技術追蹤幹細胞移植後之生物分佈與代謝 。